一、 免疫組化IHC

原理：利用抗原-抗體特異性結(jié)合原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色，從而來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))的定位、定性及相對定量的檢測技術(shù)。

應用范圍：

(1) 腫瘤診斷與分型——通過檢測ER/PR/HER2區(qū)分乳腺癌亞型，指導靶向治療；

(2) 感染性疾病檢測——HPV、EB病毒、結(jié)核桿菌的病原體定位；

(3) 神經(jīng)病理學研究——阿爾茨海默病中β-淀粉樣蛋白的檢測；

(4) 藥物研發(fā)與生物標志物發(fā)現(xiàn)——PD-L1檢測預測免疫治療效果。

結(jié)果判讀：陽性表達為棕褐色，抗體定位符合蛋白分布位置且襯染明確。

注意事項：

①　抗體選擇適用于IHC-P或者IHC-F，且種屬反應性能對應上；

②　抗體實驗條件參考說明書推薦條件；

③　抗體效價低可以延長孵育時間或增加抗體濃度；

④　對于肝臟、腸和胰腺之類內(nèi)源性過氧化物酶多的樣本，實驗過程中可加3%H2O2封閉步驟，減少組織帶來的非特異性信號；

⑤　整個實驗過程要避免干片，以免造成染色不均。

二、 多重免疫熒光mIHC

原理：基于酪胺信號放大（TSA）技術(shù)，利用抗原抗體反應對樣本中多種蛋白標志物進行染色標記，實現(xiàn)在同一組織切片上多個靶標蛋白共同染色。

酪酰胺信號放大(TSA，Tyramide signal amplification)技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶（HRP）對靶蛋白進行高密度原位標記的酶學檢測方法。熒光標記的酪胺分子在H2O2環(huán)境下被二抗標記的HRP催化激活，產(chǎn)生大量的酶促反應，使熒光素在抗原-抗體結(jié)合部位與組織周圍的蛋白殘基 (包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合，形成大量的熒光素沉積，實現(xiàn)信號放大，利用熱處理或微波處理可洗脫一抗和二抗并同時保留與組織抗原共價結(jié)合的熒光素，通過使用不同的偶聯(lián)染料多次循環(huán)實驗對多種蛋白抗原進行熒光標記，實現(xiàn)一張組織切片上多個蛋白的共染色。

應用范圍：

腫瘤微環(huán)境——解析免疫細胞和腫瘤細胞等空間分布與相互作用；

神經(jīng)科學——同時標記神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞及突觸蛋白觀察神經(jīng)組織的狀態(tài)；

感染與炎癥——病原體定位與宿主免疫應答的動態(tài)觀察；

藥效評價——發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的潛在治療靶點，如特定免疫細胞亞群、免疫調(diào)節(jié)因子等，為新藥開發(fā)和靶向治療提供線索；

病理診斷——自動化定量分析多靶標表達。

結(jié)果判讀：

①　熒光信號應僅在目標蛋白處出現(xiàn)，而陰性對照區(qū)域不應有非特異性信號；

②　不同熒光通道的曝光時間是均衡，相差不超過10倍；

常見問題及其解決方案

圖片示例：

染色技術(shù)是病理診斷和科研中不可或缺的"顯微鏡之眼"，正確選擇染色方法并精準判讀結(jié)果，才能為疾病診斷提供可靠依據(jù)。無論是常規(guī)HE染色的基礎篩查，還是特殊染色、免疫組化的精準定位，亦或是熒光染色的動態(tài)觀察，每種技術(shù)都有其獨特的應用場景和判讀要點。