常見染色類型應用及其結果判讀

每天與顏色打交道的病理科，如何“解碼”疾病信號？

在病理診斷的世界里，HE染色是基石，特殊染色是偵探，免疫組化（IHC）是精準導航，多重熒光免疫組化（mIHC）則是高科技“全景相機”——它們用色彩和熒光揭開腫瘤、炎癥、纖維化等疾病的真相。

但你是否也曾困惑：

?? HE染色的“粉藍CP”如何區(qū)分細胞形態(tài)？

?? 特殊染色為何能鎖定單一結構？

?? IHC的“陽性信號”判讀如何避免假陰/假陽？

?? mIHC的多色熒光如何同時標記10+靶點？

本文將從原理到應用，手把手教你：

? 多種染色技術的“使用場景”與“黃金組合”

? 結果判讀中的關鍵陷阱與避坑指南

? TSA技術如何升級傳統(tǒng)染色

常規(guī)染色和特殊染色

1. HE染色

原理：蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。

應用范圍：是病理學中最常用的染色方法，幾乎適用于所有組織和細胞類型的常規(guī)檢查，可用于觀察組織的一般結構、細胞形態(tài)、細胞排列以及有無炎癥、壞死、腫瘤等病變。

肝臟由肝小葉組成，肝小葉內肝細胞以中央靜脈為中心向四周輻射排布；圖1肝臟結構清楚，未見明顯病變，圖2肝組織內見有一小壞死灶，灶區(qū)內見有出血（黃色箭頭），未見其他明顯病變。

肺臟中肺小葉結構清楚，肺小葉實質由各級支氣管、肺房和呼吸毛細管組成。圖3中肺房和呼吸毛細血管淤血（藍色箭頭），輕度。圖4中肺房和呼吸毛細血管淤血（藍色箭頭），輕度；部分肺小葉肺房和呼吸毛細管間質淋巴細胞浸潤（黃色箭頭），中度。

注意事項：樣本及時固定，迅速終止細胞代謝，防止自溶和腐敗避免自融。

2. Masson染色

原理：用兩種或三種陰離子染料混合，根據分子大小，通過滲透和電子吸附，使組織著色，是結締組織常用的染色方法，以紅藍黑3種顏色顯示結締組織多種成分，尤其是對于膠原纖維和肌纖維的鑒別作用非常明確。

應用范圍：觀察器官硬化性疾?。ㄈ绺斡沧?、心肌纖維化）以及研究纖維組織增生、纖維化和肉芽腫等病理過程。

結果判讀：

◆ 膠原纖維、粘液、軟骨呈藍色

◆ 肌纖維、胞漿、纖維素、紅細胞呈紅色

◆ 胞核藍黑色

睪丸和附睪結構可辨，睪丸的被膜和間質見淡染藍色（黃色箭頭）；附睪部位被膜和間質結締組織深藍染色（紅色箭頭）

注意事項：染色時注意Weigert鐵蘇木素甲和乙的兩個組分現配現用，以及分化液的分化時間

3. 天狼猩紅染色

原理：利用膠原分子（堿性基團）與強酸性染料天狼猩紅結合，膠原纖維有正的單軸雙折射光的屬性，與天狼星紅復合染色液結合后，可增強雙折射，利用偏振光鏡使不同顏色和形態(tài)的膠原纖維得以區(qū)分。

應用范圍：主要用于各種組織病變時對膠原纖維異?；蚶w維增生的研究中,在普通光學顯微鏡下心臟血管等組織的膠原纖維被染成紅色,在偏振光鏡下對各種纖維化病變的分型和分級研究有一定的幫助作用，在病理診斷上用于鑒定纖維、平滑肌和神經來源的腫瘤有一定的意義。

結果判讀：

◆ 光學顯微鏡下，膠原纖維呈紅色，肌肉纖維、細胞質呈黃色

◆ 偏振光鏡下，Ⅰ型膠原纖維呈強橙黃色或亮紅色，Ⅲ型膠原纖維呈綠色

4. 油紅O染色

原理：油紅O是一種強脂溶劑和染脂劑，染料在細胞內脂質的溶解度大于原溶劑中的溶解度，因此染料從有機溶劑轉移到脂質中，從而實現脂肪染色。

應用范圍：用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質的異常沉著，比如發(fā)生于肝、腎、心等實質臟器的脂肪變性，在代謝、心血管、內分泌和腫瘤等疾病領域被廣泛應用。

結果判讀：脂肪呈紅色或者橘黃色，細胞核呈淡藍色

注意事項：由于二甲苯是有機溶劑，會把中性脂肪溶解，因此，石蠟切片不能用于油紅O染色，適用于冰凍切片。

5. PAS染色（過碘酸雪夫反應）

原理：高碘酸是一種氧化劑，使存在于組成內多糖分子的乙二醇基或者氨羥基的碳鍵打開，生成醛類化合物，暴露出來的游離醛基與無色品紅液作用，生成新的紅或紫紅色復合物而得到定位。

應用范圍：一般用來顯示糖元和其它多糖物質，還可以觀察腎小球基底膜、結腸杯狀細胞和中性黏液物質。

結果判讀：糖原、中性黏蛋白等呈不同程度的紫紅色，細胞核呈淡藍色

注意事項：高碘酸氧化時間不宜過長、染色溫度保持在18℃～22℃，高碘酸染液和Schiff染液放置4℃避光保存。

6. 普魯士藍染色

原理：鹽酸處理組織切片使血黃素分子的結合蛋白變性，從而釋放鐵（3+）離子，然后引入亞鐵氰化鉀，形成不溶的亮藍色顏料，用于檢測組織中的鐵核鐵蛋白。

應用范圍：檢測活檢標本中鐵的存在，尤其是骨髓和脾臟等組織，也可以用于研究鐵代謝相關疾病的動物模型。

結果判讀：鐵血紅素呈藍色，細胞核呈紅色。

注意事項：操作過程中使用玻璃器皿和蒸餾水沖洗，避免引入鐵離子造成假陽性。

7. 番紅固綠染色

原理：番紅是一種堿性染料，帶正電荷，易與帶負電的細胞成分結合，木質化細胞壁和軟骨基質中的糖胺聚糖富含負電基團，因此被染成紅色或粉紅色；固綠是酸性染料，帶負電荷，與帶正電的蛋白質（如組蛋白）或纖維素結合，纖維素細胞壁和骨基質中的膠原蛋白帶正電基團使其被染成藍綠色。

應用范圍：適用于高等植物根、莖和葉染色，以及區(qū)分骨組織和軟骨組織。

結果判讀：木質化和木栓化區(qū)域呈紅色，纖維素細胞壁呈綠色，軟骨呈紅色或橘紅色，成骨呈綠色。

注意事項：不是所有植物組織都紅綠分明，某些組織本身就沒有木質化或者木質化程度很低，如幼嫩的根莖葉片，這種組織最終染色沒有番紅的效果本身就是正常的。

8. 尼式染色

原理：尼氏體是一種嗜堿性物質，分布廣泛于各類神經元中，利用堿性染料對神經組織進行染色，能夠有效染顯尼氏體，從而觀察神經元內的細胞結構，并通過對尼氏體的觀察來評估神經元是否受損。

應用范圍：適用于檢測神經元內的尼氏小體，評估神經元的狀態(tài)

結果判讀：尼氏體呈紫色

注意事項：尼氏體離體后容易溶解，所以組織取出后應立即固定，否則難以著色，且染色后切片務必避光保存，需盡快拍照，否則容易褪色。

9. 甲苯胺藍染色

原理：甲苯胺藍是常用的人工合成染料，屬于醌亞胺染料類，有兩個發(fā)色團，還含有兩個助色團，為堿性染料，甲苯胺藍中的陽離子有染色作用，會和組織細胞的酸性物質相結合而被染色。

應用范圍：適用于軟骨染色和肥大細胞檢測，比如皮膚組織。

結果判讀：肥大細胞、軟骨基質呈紫紅色。

10. LFB染色

原理：堅牢藍(Luxol Fast Blue)屬于銅－酞箐染料，在酒精溶液中具有與髓鞘磷脂結合的染色特性，形成藍色復合物。

應用范圍：適用于髓鞘疾病的研究和診斷。

結果判讀：髓鞘呈亮藍色。

注意事項：

①　染色時，LFB染料需要提前預熱

②　注意染色時間，時間不足會導致髓鞘染色淺，過長則背景深

11. 抗酸染色

原理：分枝桿菌的細胞壁內含有大量的脂質，包圍在肽聚糖的外面，因此分枝桿菌不易著色，需經過加熱和延長染色時間來促使其著色。一旦經某些方法促進其著色后，就很難被酸性脫色劑脫色，從而檢測組織中的抗酸菌。

應用范圍：檢測不同組織中分枝桿菌

結果判讀：分酸桿菌呈紅色，背景呈藍色