試劑盒說明：

免疫組化利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。弗瑞思免疫組化檢測試劑盒具有高靈敏性、高特異性及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，多個HRP聚合物直接與二抗相連，極大地放大抗原抗體結(jié)合的信號。試劑盒提供的DAB顯色試劑為增強(qiáng)型顯色試劑，且自帶稀釋液，避免了由于水質(zhì)的不同對DAB顯色造成的影響；與一般DAB試劑相比，增強(qiáng)型的穩(wěn)定性顯著提高，顯色更醒目，敏感性更高。

試劑盒以外自備試劑

二甲苯、乙醇、蒸餾水或去離子水、一抗、蘇木素染液、分化液、組化筆、顯微鏡或其他成像設(shè)備等。

試劑A和B均為濃縮液，使用時需按照表格中的稀釋倍數(shù)用蒸餾水或去離子水配制為1X工作液。

預(yù)期用途

      主要用于組織石蠟切片樣本的免疫組織化學(xué)染色，同時兼容冰凍組織切片和細(xì)胞爬片，建議用戶根據(jù)樣本類型優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

染色方法及操作步驟（石蠟切片為例）：

1、脫蠟：脫蠟前應(yīng)將組織玻片在烤片機(jī)上60℃烘烤1-2hr，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）（Ⅲ）浸泡，各10min

2、水化：無水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）5min，下行至95%、80%、70%酒精（Ⅰ）（Ⅱ）各5min

3、1×PBST（提前配制好試劑B）沖洗3次，3min/次

4、抗原修復(fù)：提前配置好試劑A，預(yù)加熱至98-100℃，將脫蠟后的玻片置于A中修復(fù)（根據(jù)具體情況選擇修復(fù)液種類，15-20min），自然冷卻20min以上，冷卻至室溫

5、1×PBST沖洗3次，3min/次

6、封閉：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑（試劑C）孵育10-15min(可選步驟)，隨后1×PBST沖洗3次，3min/次

7、滴加血清封閉液試劑(D)，室溫孵育10-30min，甩去多余液體

8、滴加一抗工作液，4℃過夜或37℃孵育1hr（孵育條件根據(jù)抗體說明書推薦條件進(jìn)行調(diào)整）

9、1×PBST沖洗3次，3min/次

10、滴加即用型二抗（試劑F），室溫孵育30min左右

注：若一抗是兔抗，則滴加試劑(F)中R液，室溫孵育30min,若一抗是小鼠抗體，則先滴加試劑(F)中M液，室溫孵育15min，隨后1×PBST沖洗3次，3min/次，再滴加試劑(F)中R液，室溫孵育15min

11、1×PBST沖洗3次，3min/次

12、顯色：用稀釋好的DAB工作液進(jìn)行顯色，每張切片加約100ul DAB工作液(視切片大小以完全覆蓋切片組織為宜)，DAB顯色時間以實(shí)際鏡檢玻片顯色為準(zhǔn)

13、自來水沖洗5-10min終止反應(yīng)

14、復(fù)染：蘇木精復(fù)染2min，1%鹽酸酒精分化數(shù)秒

15、自來水沖洗10-15min

16、脫水封片：將切片依次放入70%酒精5min-80%酒精5min-95%酒精5min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片，鏡檢掃描

染色結(jié)果：

陽性表達(dá)為在抗原定位處呈棕黃或棕褐色。

注意事項(xiàng)：

1. 如對所染抗體及樣本本身屬性不了解，建議同時做陰性對照和陽性對照；

2. DAB避光放置，現(xiàn)配現(xiàn)用30分鐘內(nèi)顯色；

3. 開蓋后應(yīng)盡快使用，保存不當(dāng)易導(dǎo)致試劑效價降低；

4. 整個染色過程切忌干片，以免引起染色不均；

5. 免疫組化步驟繁瑣，請仔細(xì)設(shè)計(jì)檢查好實(shí)驗(yàn)步驟再繼續(xù)；

6. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作。