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油紅O染色試劑盒 | ||||
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存 | ||
試劑(A):油紅O染液 | A1:油紅O母液 | 50ml | 100ml | 2-8℃,避光 |
A2:油紅O稀釋液 | 50ml | 100ml | 2-8℃ | |
臨用前按A1:A2=3:2配制比例混合,靜置10min,現(xiàn)配現(xiàn)用 | ||||
試劑(C):蘇木素 | 50ml | 100ml | 室溫 | |
試劑(D):分化液 | 50ml | 100ml | 室溫 | |
說明書 | 一份 |
儲存條件:避光保存,有效期1年。
染色原理:
油紅O染色是用于觀察脂質(zhì)含量的常用方法。油紅O屬于偶氮染料,是很強的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀,脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類,它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當(dāng)組織切片置入染液時,染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)/脂滴中,使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。
染色方法及操作步驟:
(1) 冰凍切片從-20℃取出后室溫靜置5-10min恢復(fù)至常溫
(2) 油紅O母液與稀釋液3:2配制成油紅O工作液,油紅O工作液染色8-15min(加蓋避光)
(3) 取出切片,停留3s后浸入60%異丙醇分化數(shù)秒
(4) 切片依次浸入純水ⅠⅡ中浸洗數(shù)秒
(5) 切片浸入蘇木素染液對細(xì)胞核進行染色10-60s(視組織情況調(diào)整染色時間)
(6) 分化液浸泡數(shù)秒
(7) 自來水洗1-2min
(8) 稍微晾干水分后滴加甘油明膠封片劑封片
染色結(jié)果:
脂肪呈橘紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色。
注意事項:
(1) 油紅O工作液不宜提前配制,現(xiàn)配現(xiàn)用,每次實驗前需過濾后再使用;
(2) 染色后盡快掃描,以免影響染色效果;
(3) 由于脂肪易溶于有機溶劑,因此脂肪通過冰凍切片染色來顯示;
(4) 載玻片上的著色組織不得干燥后封固,以免影響染色效果。