近年關于三級淋巴結（Tertiary Lymphoid Structures, TLS）的研究熱度一直居高不下，PubMed數據庫近五年收錄的文章近200篇，2024年就超過100余篇，2024年8月，《Nature Reviews Cancer》一篇Tertiary lymphoid structures in anticancer immunity關于三級淋巴結的綜述，文章從TLS誘導、不同階段的組成、成熟、B細胞和T細胞的免疫應答以及負調控機制、還討論了TLS臨床預后價值以及TLS與治療反應之間的關系，最后提出了一些臨床前證據，以支持操縱TLS的形成和功能可能是一種強有力的下一代腫瘤免疫治療的觀點。

圖1 TLS三種主要狀態(tài)

2、TLS的組成及成熟度

存在位置：腫瘤、腫瘤邊界、癌旁或腫瘤樣本中按基質、瘤內、瘤周(TLS 在侵襲性邊緣或基質中比在腫瘤核心中更豐富）。

圖2 成熟TLS常見標記物多色免疫熒光染色效果圖

表1整理了人和小鼠代表性文獻中不同細胞類型/分布位置/特異性標記物組合，供大家參考。

表1人和小鼠TLS標記物整理

3、TLS中B區(qū)/T區(qū)免疫效應機制

TLS不僅可以替代SLO（次級淋巴器官）以產生特定的適應性抗腫瘤反應，而且它們還可以與SLO并行作用參與適應性抗腫瘤免疫。免疫反應包含B細胞介導體液免疫或者T細胞介導的適應性免疫

B 細胞區(qū)：主要包含初始 B 細胞（Naive B cell）、濾泡樹突狀細胞（FDC）、漿細胞（Plasma cell）和記憶 B 細胞（Memory B cell）。初始 B 細胞通過 T 細胞受體（TCR） - 主要組織相容性復合體 II 類（MHC class II）與輔助 T 細胞（Th cell）相互作用，并在細胞因子（如 IL - 6、IL - 21）的刺激下，經歷 B 細胞擴增、類別轉換重組和體細胞高頻突變等過程，最終分化為漿細胞和記憶 B 細胞。漿細胞分泌抗體，記憶 B 細胞則在再次遇到相同抗原時迅速反應。

T細胞區(qū)：有初始 CD4? T 細胞、樹突狀細胞（DC）、效應 CD4? T 細胞、效應 CD8? T 細胞等。樹突狀細胞攝取和處理抗原后，將抗原肽呈遞給初始 T 細胞，激活 T 細胞。初始 CD4? T 細胞在細胞因子（如 IL - 2、IL - 12、IFNγ）的作用下分化為效應 CD4? T 細胞，效應 CD4? T 細胞進一步輔助 B 細胞免疫反應或激活其他免疫細胞。初始 CD8? T 細胞也可被激活并分化為具有細胞毒性的效應 CD8? T 細胞，殺傷被病原體感染的細胞 。圖3中還展示了一些免疫檢查點分子，如 CTLA - 4、PD - 1、ICOS 等，它們在調節(jié) T 細胞的活化和功能方面發(fā)揮重要作用；給相關研究提供理論基礎。

圖3 TLS中主要效應和調控機制

4、TLS作為一種強大的預后生物標志物

通過檢測缺乏或具有不同密度的TLS的腫瘤患者，TLS的存在在已被報道的大多數實體腫瘤類型與良好預后相關，然而也有一些報道TLS存在mTOR通路的改變或富含惡性細胞因子導致不良預后；TLS的預后價值與腫瘤的免疫原性、新抗原的表達水平、翻譯后修飾的程度和病毒來源等參數，以充分了解腫瘤與TLS存在之間的關系。

5、操縱TLS的形成和功能與后續(xù)治療的關系

 當前免疫治療方法遇到了嚴重的局限性需迭代治療，免疫逃避抗體治療或T細胞作用通過各種阻力機制，一個強大的免疫抑制微環(huán)境的存在和“冷”腫瘤的存在免疫細胞稀缺，因此，誘導適應性記憶多克隆抗腫瘤免疫反應的TLS形成，并操縱TLS以優(yōu)化腫瘤住院患者的功能是一種很有前途的免疫治療方法； 最后總結了針對TLS的治療策略：一方面誘導TLS的形成：通過靶向腫瘤分子，使用 LIGHT 或 LTα 等誘導劑，促使基質細胞分泌趨化因子，從而誘導 TLS 形成增加抗腫瘤作用；還可以增加活化免疫細胞相互作用，如CD4 + T 細胞可分化為濾泡輔助性 T 細胞（TFH）和調節(jié)性 T 細胞（Treg），TFH 細胞支持 B 細胞免疫反應，抑制Treg分化可有效增加免疫效應；另一方面：利用治療載體：腺相關病毒（AAV）可作為載體，傳遞相關治療分子 等為抗腫瘤治療提供方向。

圖4.針對TLS的治療策略

6、TLS常用檢測方法

蘇木精－伊紅染色（H&E）：能快速觀察組織中TLS的存在、分布、數量等信息；

免疫組織化學染色（IHC）：通過蛋白標記物準確判斷TLS的成熟度；

多重免疫組織化學（mIHC）：通過單張切片多指標標記，可以快速確定TLS的存在、分布、數量、成熟度及免疫狀態(tài)等信息；更適用TLS檢測；

基因表達譜：針對TLS形成相關的免疫細胞募集、免疫細胞活化及分化、免疫細胞遷移等細胞因子的研究，檢測指標較多，要定制費用高。

空間轉錄組：深度解析TLS細胞組成、免疫細胞募集、免疫細胞活化及分化免疫細胞遷移及相互作用；經費充足組織要求比較高。

弗瑞思病理也整理了關于TLS常見組合及常見組成細胞對應標記物供各位老師參考；

TLS常見細胞類型：

CD4+CD20+CD23+CD68+CD56+PANCK

CD4+CD19+CD21+Ki67+CD138

TLS常見細胞類型及活化/極化：

CD3+CD8+CD163+Foxp3+Ki67+CK

CD8+CD20+CD23+CD56+GZMB+PANCK

CD3+CD20+CD23+TNF-α+GZMB+PANCK

CD45+CD3+CD21+IL-33+MECA-79

常見細胞類型+免疫抑制性細胞

CD4+CD20+CD21+Foxp3+PANCK

CD3+CD20+CD68+CD206+PANCK

CD4+CD20+CD23+Bcl6

常見細胞組成+免疫檢查點

CD3+CD20+CD68+CD21+PD1+PANCK

CD3+CD20+CD21+CD23+KI67+PANCK

CD8+CD4+CD20+BCL6+CD138+CA9

TLS相關文獻：

Teillaud, Jean-Luc, et al. "Tertiary lymphoid structures in anticancer immunity." Nature Reviews Cancer 24.9 (2024): 629-646.

Xie, Yi, et al. "Immune microenvironment spatial landscapes of tertiary lymphoid structures in gastric cancer." BMC medicine 23.1 (2025): 59.

Amisaki, Masataka, et al. "IL-33-activated ILC2s induce tertiary lymphoid structures in pancreatic cancer." Nature (2025): 1-9.

Groen-van Schooten, Tessa S., et al. "Mapping the complexity and diversity of tertiary lymphoid structures in primary and peritoneal metastatic gastric cancer." Journal for Immunotherapy of Cancer 12.7 (2024): e009243.

Meylan, Maxime, et al. "Tertiary lymphoid structures generate and propagate anti-tumor antibody-producing plasma cells in renal cell cancer." Immunity 55.3 (2022): 527-541.

Ruffin, A. T., et al. "B cell signatures and tertiary lymphoid structures contribute to outcome in head and neck squamous cell carcinoma. Nat Commun 12: 3349." 2021,

Xu, Wenhao, et al. "Heterogeneity in tertiary lymphoid structures predicts distinct prognosis and immune microenvironment characterizations of clear cell renal cell carcinoma." Journal for immunotherapy of cancer 11.12 (2023): e006667.

Germain, Claire, et al. "Tertiary lymphoid structure-B cells narrow regulatory T cells impact in lung cancer patients." Frontiers in immunology 12 (2021): 626776.