二、研究結(jié)果

研究人員將新生成的泛癌 scRNA-seq 數(shù)據(jù)集與其他 54 項已發(fā)表的研究組合在一起，通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和篩選，編制了包含19種主要癌癥類型的649名患者的948個樣本的511847個B細(xì)胞的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組圖譜，主要涵蓋了腫瘤組織、鄰近非腫瘤組織（ANT）和外周血。根據(jù)它們的典型標(biāo)記物的高表達(dá)區(qū)分了五個B細(xì)胞群，即Bn細(xì)胞、Bm細(xì)胞、Bgc細(xì)胞、抗體分泌細(xì)胞（ASC）和循環(huán)B細(xì)胞。將上述五個主要簇分別聚類，發(fā)現(xiàn)了總共 20 種不同的細(xì)粒B細(xì)胞亞型，每種亞型都有特定的特征基因。重建的BCR序列能夠檢查 TIBs 的各種克隆型特征（STAR方法），在B細(xì)胞主要譜系中發(fā)現(xiàn)了不同的同種型分布模式。并且研究人員在12個腫瘤組織上用四個面板進(jìn)行了多重免疫熒光實驗，繪制腫瘤中B細(xì)胞主要譜系的空間布局。

研究人員利用泛癌圖譜檢查不同癌癥間TIBs的異質(zhì)性，發(fā)現(xiàn)不同腫瘤中B細(xì)胞比例因癌癥類型而異。在一些起源于粘膜組織的癌癥類型中，觀察到ANT和腫瘤之間B細(xì)胞群大小呈正相關(guān)，這反映組織中炎癥狀態(tài)或TLS的存在可能導(dǎo)致觀察到的B細(xì)胞水平較高。研究人員根據(jù)主要譜系比例發(fā)現(xiàn)TIBs的組成異質(zhì)性，可能受到宿主器官固有特征的影響?？傮w而言，綜合數(shù)據(jù)集提供了對泛癌水平TIBs復(fù)雜性和異質(zhì)性的見解。

泛癌圖譜還可以分析稀有細(xì)胞類型的相關(guān)轉(zhuǎn)錄特征和轉(zhuǎn)換動力學(xué)。以Bgc細(xì)胞為例，研究人員確定了兩個Bgc亞群，c12和c13，并證實了它們在幾乎所有分析的癌癥類型中存在。C12細(xì)胞參與T細(xì)胞活化、抗原加工和呈遞調(diào)節(jié)途徑，c13參與細(xì)胞增殖相關(guān)途徑，并且c12和c13的豐度是相關(guān)的，表明它們經(jīng)常共存，存在狀態(tài)轉(zhuǎn)換。為了進(jìn)一步闡明Bgc細(xì)胞的進(jìn)化動力學(xué)，研究人員根據(jù)相應(yīng)細(xì)胞的第三個互補決定區(qū)（CDR3）序列（STAR 方法）計算重建了譜系樹，發(fā)現(xiàn)c12和c13細(xì)胞之間的多輪交替轉(zhuǎn)換表現(xiàn)為SHMs逐漸積累，并且伴隨著這一過程出現(xiàn)了Bm細(xì)胞和PC。研究人員繼續(xù)探索Bgc細(xì)胞與其他B細(xì)胞亞群和腫瘤內(nèi)其他免疫亞型關(guān)聯(lián)性，發(fā)現(xiàn)CD4 T濾泡輔助細(xì)胞（Tfh）細(xì)胞與Bgc細(xì)胞表現(xiàn)出最強(qiáng)的正相關(guān)。

為了進(jìn)一步了解B細(xì)胞亞群在腫瘤中的作用，研究人員利用TCGA數(shù)據(jù)來探測B細(xì)胞亞群特征與校正總B細(xì)胞豐度與癌癥患者總生存期的關(guān)聯(lián)。B細(xì)胞亞群與患者預(yù)后相關(guān)性依賴癌癥類型，F(xiàn)CRL4 Bm特征表達(dá)相對較高的患者在泛癌水平上往往表現(xiàn)出較長的生存期。

據(jù)報道調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）起促腫瘤作用并與不良預(yù)后相關(guān)，研究人員檢測Bregs的細(xì)胞因子表達(dá)，發(fā)現(xiàn)IL10的表達(dá)分散在不同的B細(xì)胞主要簇中，并且這些不同簇中也高表達(dá)其他標(biāo)志物，簡而言之，這些結(jié)果表明B細(xì)胞分化階段的標(biāo)志物會變化，至少Bregs或IL10 B細(xì)胞可能不代表B細(xì)胞的不同譜系。

文章前面指出FCRL4 Bm細(xì)胞在腫瘤中的關(guān)鍵作用，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)它幾乎在所有癌癥類型的腫瘤中，其中一小簇Bm細(xì)胞被區(qū)分為FCRL4 Bm細(xì)胞，腫瘤浸潤FCRL4 Bm細(xì)胞與先前報道的ABC的轉(zhuǎn)錄存在相似性，因此，將這類細(xì)胞命名為腫瘤相關(guān)ABC（TAAB）。

    進(jìn)一步探索TAABs 在腫瘤中的分子特性，發(fā)現(xiàn)TAAB表現(xiàn)出B細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達(dá)升高，利用SCENIC的調(diào)節(jié)子分析也證實了這些轉(zhuǎn)錄因子的活性，這些結(jié)果表明TAAB可能在腫瘤中經(jīng)歷抗原刺激的激活。將偽時間與基因表達(dá)譜相關(guān)聯(lián)表明，偽時間的增加伴隨著ABC標(biāo)志基因、T細(xì)胞共刺激相關(guān)基因、MHC-II基因和炎性細(xì)胞因子受體的逐漸上調(diào)。

文獻(xiàn)報道TIBs參與其他免疫細(xì)胞，尤其是T細(xì)胞，研究人員探索TME中TAAB的特征，對來自三種癌癥類型的7個腫瘤樣本進(jìn)行mIHC定位，定量發(fā)現(xiàn)TAAB與最近的CD4T細(xì)胞中位距離約10 μm，TAAB和CD4 T細(xì)胞之間的連接處有明顯的HLA-DR表達(dá)，表明TAAB可能通過MHC-II抗原呈遞為CD4 T細(xì)胞活化提供信號。腫瘤樣本上的mIHC顯示，位于TAAB附近（< 20 μm）的CD4 T細(xì)胞表現(xiàn)出更高的活化標(biāo)志物CD69表達(dá)。IL-21已知可促進(jìn)B細(xì)胞活化和擴(kuò)增，并作為PC分化的最有效誘導(dǎo)劑發(fā)揮作用，僅由CD4 T細(xì)胞的CXCL13亞群表達(dá)，在TAAB中顯示出比腫瘤中所有其他Bm亞群更高的信號活性，意味著TAAB和腫瘤反應(yīng)性CD4 T細(xì)胞在TME中共存。

綜上所述，TAAB通過與CD4 T細(xì)胞相互作用，作為抗原呈遞細(xì)胞參與T細(xì)胞反應(yīng)和作為介導(dǎo)體液反應(yīng)的PC前體，與它們在多種癌癥中的良好預(yù)后相關(guān)，與整體B細(xì)胞存在無關(guān)。