廣西醫(yī)科大學(xué)趙永祥教授團(tuán)隊(duì)成功開發(fā)了一種重組新城疫病毒（NDV-GT），該病毒攜帶豬a1,3GT基因，能夠引發(fā)超急性排斥反應(yīng)。通過臨床前研究驗(yàn)證了其可行性。靜脈注射的NDV-GT在CRISPR介導(dǎo)的原代肝細(xì)胞癌猴模型中，顯示出更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞清除能力。一項(xiàng)針對(duì)20名復(fù)發(fā)或難治性轉(zhuǎn)移性癌癥患者的干預(yù)性臨床試驗(yàn)顯示，該療法具有90.00%的疾病控制率和持久的療效，且未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，患者體內(nèi)也未檢測(cè)到功能性中和抗體，這進(jìn)一步表明在這些條件下，免疫原性極低，并證明了NDV-GT在免疫病毒療法中的可行性。綜上所述，趙永祥教授團(tuán)隊(duì)的研究結(jié)果證明了靜脈注射NDV-GT的安全性和有效性，為腫瘤治療及其他領(lǐng)域提供了創(chuàng)新的溶瘤病毒療法技術(shù)。

重組NDV-GT的工程化是通過反向遺傳技術(shù)實(shí)現(xiàn)的

豬α1,3GT基因被插入到NDV序列中Pme I酶切割位點(diǎn)的中間。目標(biāo)基因片段通過聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增，并通過測(cè)序確認(rèn)了α1,3GT基因成功插入NDV，確保了復(fù)制保留能力的維持。為了研究NDV-GT的特異性感染、復(fù)制和傳播，研究團(tuán)隊(duì)使用了HepG2人肝癌細(xì)胞、HO8910人卵巢癌細(xì)胞、HeLa人宮頸癌細(xì)胞和THLE-2正常肝細(xì)胞作為代表性模型，結(jié)果表明親本NDV和重組NDV-GT成功感染了HepG2、HO8910和HeLa細(xì)胞。外源性a1,3GT基因在腫瘤細(xì)胞中高效表達(dá)，NDV-GT對(duì)腫瘤細(xì)胞具有特異性靶向作用。此外，重組NDV-GT對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的抑制效果優(yōu)于親本NDV。aGal增強(qiáng)的裂解能力使NDV-GT在誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡方面達(dá)到了最高水平。這表明aGal的表達(dá)增強(qiáng)了NDV-GT的溶瘤活性。72小時(shí)的孵育導(dǎo)致約90%的抑制率。

NDV-GT的溶瘤效應(yīng)及其在食蟹猴中通過CRISPR介導(dǎo)的原發(fā)性肝癌中的作用機(jī)制研究。

使用HCC食蟹猴模型可以促進(jìn)NDV-GT從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化，因?yàn)樵撃Ｐ团c人類具有高度相似性。通過靜脈注射NDV-GT后，分別在0、24、48、72和96小時(shí)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行了手術(shù)活檢，進(jìn)行了免疫熒光染色，并進(jìn)行了分析，以研究NDV-GT在猴肝腫瘤中的擴(kuò)散時(shí)間和范圍。結(jié)果顯示，代表NDV的綠色熒光細(xì)胞數(shù)量隨著時(shí)間逐漸增加，在72小時(shí)達(dá)到峰值，并在96小時(shí)時(shí)仍然廣泛存在。治療后第三個(gè)月末，NDV-GT組的腫瘤顯著小于NDV組和PBS組，治療停止3個(gè)月后，腫瘤完全消失。TUNEL分析表明，NDV-GT誘導(dǎo)了廣泛的細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤退化，并顯著降低了作為肝細(xì)胞癌（HCC）標(biāo)志物的AFP水平。

在接受NDVGT治療后，腫瘤組織中PAF和纖維蛋白原的表達(dá)水平顯著增加，并伴有血栓形成的跡象。NDV-GT治療后，腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物（CD31和CD105）的表達(dá)顯著減少，這表明血栓主要由腫瘤內(nèi)的血管萎縮和閉塞引起。這些發(fā)現(xiàn)表明，NDV-GT治療有效地表達(dá)了aGal，使其成為腫瘤血管內(nèi)天然抗體的目標(biāo)。這種靶向作用觸發(fā)了超急性排斥反應(yīng)，導(dǎo)致血小板激活和聚集。這些過程共同促進(jìn)了血栓的形成和血管閉塞，最終導(dǎo)致腫瘤縮小和壞死。此外，超急性排斥反應(yīng)還觸發(fā)了體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)的激活和放大，最終在NDV-GT治療組中實(shí)現(xiàn)了腫瘤的完全消退。

腫瘤微環(huán)境中的炎癥和趨化因子促進(jìn)了T細(xì)胞的遷移和浸潤，強(qiáng)調(diào)了CD4+和CD8+ T細(xì)胞激活對(duì)于成功免疫治療的重要性。作為天然抗原，aGal促進(jìn)了T細(xì)胞的分化、增殖和活化，導(dǎo)致CD4+和CD8+ T細(xì)胞分泌干擾素（IFN）-γ和腫瘤壞死因子α（TNF-α）。

理解NDV-GT的溶瘤效應(yīng)背后的分子機(jī)制至關(guān)重要。利用芯片技術(shù)，在治療后鑒定出的差異表達(dá)蛋白質(zhì)中，通過串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽分析發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞凋亡相關(guān)的改變，特別是低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2（LRP2），以及NDV感染的HepG2細(xì)胞中細(xì)胞因子/受體的變化最小。Janus激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活因子（JAK-STAT）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）、Ras和白細(xì)胞介素（IL）-17通路中的蛋白質(zhì)，尤其是Akt，表現(xiàn)出差異表達(dá)。富集因子分析強(qiáng)調(diào)了Akt-IkB激酶（IKK）-核因子kB（NF-kB）信號(hào)通路的富集，表明NDV-GT對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。Western印跡顯示，在Akt抑制劑（AKT-IN-6）處理后，NDV-GT下調(diào)了Akt、IKK和NF-kB的磷酸化水平，同時(shí)上調(diào)了caspase-9和裂解的caspase-3，證實(shí)了其通過抑制Akt-IKK-NF-kB途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。因此，NDV-GT通過Akt-IKK-NFkB途徑有效介導(dǎo)了細(xì)胞凋亡，盡管分析有限，但為肝癌治療提供了新的見解。

NDV-GT能夠直接裂解腫瘤細(xì)胞，破壞腫瘤內(nèi)的血管，并編碼aGal，從而引發(fā)超急性排斥反應(yīng)和血栓形成。隨后，NDV-GT改善了免疫抑制的微環(huán)境，激活體液和細(xì)胞免疫，緩解了浸潤障礙，招募T細(xì)胞，并放大了級(jí)聯(lián)免疫反應(yīng)。

NDV-GT在治療20名難治性癌癥（包括肝癌、卵巢癌、宮頸癌、肺癌、食道癌、直腸癌和乳腺癌）及黑色素瘤患者中的應(yīng)用

在HCC猴模型中，已建立的生物安全性和溶瘤機(jī)制為NDV-GT在癌癥患者中的擴(kuò)展治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。在此背景下，一項(xiàng)干預(yù)性臨床試驗(yàn)招募了20名難治性癌癥患者，綜合來看，來自20名不同器官部位晚期癌癥患者的這些數(shù)據(jù)表明，成功的NDV-GT治療無論腫瘤類型如何，都能產(chǎn)生相似的療效。